摘要：为了解屠宰场非洲猪瘟病毒（ASFV）污染情况，评估其潜在传播风险，2018年10月，在湖南省86 个屠宰场采集样品895份，使用荧光PCR方法进行ASFV核酸检测。结果显示，11个屠宰场的43份样品呈 ASFV核酸阳性，场阳性率为12.8%，样品阳性率为4.8%。调查分析表明，ASFV阳性屠宰场与是否屠宰过来自疫点的生猪及场内环境、工具、车辆的消毒情况相关。调查提示，屠宰场应继续加大ASFV自检力度，政府和主管部门需继续加强检疫监管，以降低ASF扩散风险。
非洲猪瘟（Africanswinefever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（AfricanswinefevervirusASFV）引起猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，对染疫国家的生猪产业和相关国际贸易影响巨大，是世界动物卫生组织（OIE）的须通报动物疫病，属于我国一类动物疫病。ASFV宿主是家猪和野猪，不感染人，主要通过间接和直接接触传播，发病猪、隐性感染猪及其排泄物、污染物以及软蜱等媒介吸血昆虫是其主要传染源。自2018年8月，ASF疫情首次在辽宁省发现以来，短期内在全国多个省份接连发现，导致大量生猪被扑杀，经济损失惨重。2018年10月湖南省发现首起ASF疫情，且在1个月内连续发现7起， 给该省生猪养殖业带来严重打击。为了解湖南省屠宰场ASFV污染情况，在疫情暴发期内，对湖南省疫点、疫区以及非疫区屠宰场开展了ASFV 监测，以期为评估ASFV潜在传播风险提供参考。
1 材料与方法
1.1 样品采集
2018年10月，在湖南省3个ASF疫区市、2个非疫区市86个屠宰场，选择待宰圈、电麻前生猪通道、放血槽、盛血器、脱毛池、屠宰场总排水沟、屠宰线、肉品存储库等不同生产环节，采集样品895份，其中环境拭子样品757份、猪血样品17份、猪肉样品109份以及屠宰场内加工的香肠8份、腊肉4份。
1.2 试剂
ASFV荧光PCR检测引物和探针：由中国动物卫生与流行病学中心提供；荧光PCR扩增试剂盒：购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司；病毒RNA/DNA提取试剂盒：购自苏州天隆生物科技股份公司。
1.3 主要仪器设备
NP968核酸提取仪：西安天隆；ABI7500fast荧光PCR仪：赛默飞；生物安全柜：美国BAKER；高压灭菌锅：上海申安。
1.4 样品处理和检测
按中国动物卫生与流行病学中心编制的《非洲猪瘟实验室检测操作程序》进行样品处理、荧 光PCR扩增、结果判定和废弃物处置，按照RNA/ DNA提取试剂盒说明书提取核酸。
1.5 屠宰场清洗消毒
待宰圈舍、进猪通道、卸猪台、淋浴间等区域，每循环1次，彻底清理1次粪便，清水冲洗后 用2%~5%烧碱液喷洒，30min后再用清水冲洗；屠宰、分割加工车间，每次生产结束后先用清水冲洗，再用0.1%~0.2%的戊二醛喷雾消毒，30min 后用清水冲洗。
1.6 阳性屠宰场检测
根据《湖南省防治重大动物疫病指挥部办公室关于因非洲猪瘟关联暂停的屠宰场恢复生产有关事项的通知》（湘防重病办﹝2018﹞15号）的规定， 暂停疫情县以外、与疫点有流行病学关联的ASFV检测阳性屠宰场的屠宰活动15d，在此期间进行彻底清洗消毒，分别于暂停屠宰后5、10、14d，在待宰圈、屠宰间、放血槽、打毛间、总排水口等5个部位，各采集5份环境样品，共25份/次进行ASFV检测。
2 检测结果
2.1 总体情况
86个屠宰场的895份样品中，11个场的43 份样品为ASFV核酸阳性，场阳性率为12.8%，样品阳性率为4.8%。43份阳性样品包括36份环境 拭子样品、1份猪肉样品、5份香肠样品、1份腊肉样品，其中阳性环境拭子主要采自屠宰间、放血槽、排水沟、脱毛池、生猪清洗间等位置。不同类型屠宰场检测结果见表1，不同类型样品检测结果见表2。
1个疫情无关联阳性屠宰场（正常屠宰），首次采样（在待宰圈、放血槽、盛血器、电麻前生猪通道、屠宰场总排水沟、屠宰线、脱毛池等7个工作地，每个地点随机采集环境拭子3份）2d后，再次采样（7个环节，每个环节5份，共35份）检测，结果全为阴性。其间屠宰场按日常清洗消毒程序，其清洗消毒2次。另外10个暂停屠宰的阳性屠宰场，其间共清洗消毒3次，每次检测均为阴性。
3 分析与讨论
本次监测发现，屠宰场内的ASFV样品阳性率为4.8%，场阳性率为12.8%，表明屠宰环节存在ASFV污染。疫情关联屠宰场阳性率（75.0%） 远高于疫点县屠宰场（0）和疫情无关联屠宰场（2.9%），差异有统计学意义（P<0.01），表明屠宰场ASFV污染与屠宰疫点养猪场生猪直接关联，这也符合ASF高度接触传播的流行病学特征。
AFSV抵抗力强，在外界可长期存活，任何与感染生猪接触的行为均有引发ASF疫情的风险。本次检测发现的43份阳性样品中，有36 份（83.7%）为环境拭子样品，表明病毒一旦随生猪进入屠宰场，就会潜入屠宰间、放血槽、排水沟、脱毛池等区域，继而污染整个屠宰环节。如果屠宰场与养殖场之间存在运输人员、车辆、工具等的频繁接触，那么病毒汇集、扩散风险巨大，如果不经过严格消毒，就会使病毒进一步扩散。从湖南省屠宰场的消毒监测效果看，通过严格和规范的消毒，可以有效杀灭ASFV。因此，要做好屠宰场内环境、运输车辆的清洗消毒工作，确保病原在屠宰场内不交叉、不回流。
监测结果显示，屠宰场猪肉样品阳性率为0.9%，表明屠宰场猪肉产品存在ASFV污染风险，其原因与屠宰了隐性带毒猪以及屠宰场的病毒污染有关。另外，监测的所有香肠、腊肉样品均来自于同一个疫情关联屠宰（加工）企业。溯源调查发现，在采样监测前，该场多次宰杀来自疫情场的生猪，因此及时开展疫情场的外调记录调查，追踪屠宰场的动物产品流向，将有助于降低病毒经产品扩散的风险。
此外，从与疫点养殖场有流行病学关联屠宰场的环境、猪肉及其制品监测结果可以看出，屠宰场是ASF防控的关键主体。如果屠宰场屠宰了隐性带毒生猪，病毒就会进入产品并长时间存活，这会给ASF防控和净化带来更大困难。因此，建议根据农业农村部统一部署，要求屠宰企业继续加大ASFV自检力度，政府和技术部门加强指导和监督，把好屠宰检疫关。
4 结论
本监测利用荧光PCR方法，对湖南省86个屠宰场进行ASFV核酸检测，在11个屠宰场的43份样品中检测出核酸阳性，场阳性率为12.8%，样品阳性率为4.8%，表明屠宰场存在ASFV污染，其来源主要与屠宰疫情养殖场生猪有关。屠宰场的日常清洗消毒，可有效消除病毒，对于ASF防控具有积极意义。因此，屠宰场应加强AFS自检工作，坚持日常清洗消毒制度，阻断病毒通过屠宰产品再次扩散传播。
